چگونه یک شمارش کلنی  انجام دهیم؟

یکی از روش های کلاسیک برای تعیین غلظت میکروب ها در نمونه، رقیق کردن نمونه، رشد میکروب ها در پلیت ها و شمارش کلنی ها است. میکروب های کشت داده شده از یک واحد تشکیل دهنده کلنی متشکل از یک یا چند سلول به یک کلنی قابل مشاهده رشد می کنند که قابل مشاهده و شمارش است. باکتری ها رایج ترین میکروبی هستند که با استفاده از شمارش پلیت ها ارزیابی می شوند. شمارش کلونی برای شناسایی و شمارش میکروب ها در خاک، آب و غذا استفاده می شود. پروتکل های شمارش کلنی ها بر یک رویکرد دقیق و روشمند تأکید دارند.

رقیق کردن نمونه ها، کشت روی سطح پلیت و انکوباسیون

اگر به سادگی یک نمونه میکروبی را روی یک پلیت آگار کشت دهید، تعداد زیادی واحد تشکیل دهنده کلنی خواهید دید که کلنی های جداگانه با هم ترکیب می شوند و شمارش آنها غیرممکن می شود. برای حل این مشکل، نمونه را در یک محیط مایع مخلوط کرده، مقدار کمی از آن مخلوط را بردارید و آن را بیشتر رقیق کنید. این روند را شش تا 10 بار تکرار کنید. رقت نهایی را روی یک صفحه آگار پخش کنید و آن را به مدت چهار تا هفت روز قبل از شمارش کلنی ها انکوبه کنید.ترفند اصلی در شمارش کلنی ها این است که هر نقطه کلنی را یک بار بشمارید. یک روش این است که ظرف پتری را روی یک پس‌زمینه شبکه قرار دهید و کلنی‌ها را در هر سلول شبکه شمارش کنید و در یک الگو در تمام سلول‌ها حرکت کنید. علامت گذاری کلنی های شمارش شده در پشت ظرف پتری نیز می تواند یک رویکرد مفید باشد.

تست شمارش کلونی چیست؟

تعداد کل زنده مانی (Total Viable Count) آزمایشی است که تعداد کل میکروارگانیسم‌هایی مانند باکتری‌ها، مخمرها یا گونه‌های کپک را که در یک نمونه آب وجود دارند، تخمین می‌زند. TVC ممکن است به عنوان تعداد کلنی های هوازی نیز بیان شود. تکنیک کلنی کانت (Colony counting) برای کشت باکتری و قارچ از یک محیط مایع بر روی پلیت کشت در آزمایشگاه میکروبیولوژی استفاده می شود که هم روش به نسبت آسانی است و هم شمارش باکتری ها از این روش میسر می شود. روش ها زیادی تا به امروز برای جداسازی میکروارگانیسم ها شرح داده شده است که برای جداسازی باکتری ها و قارچ های متفاوت از نمونه های بالینی و یا محیط های متفاوت استفاده می شود. روش پخش کردن در سطح پلیت یکی از رایج ترین روش های کشت باکتری در آزمایشگاه میکروبیولوژی می باشد. ترفند اصلی در شمارش کلنی ها این است که هر نقطه کلنی را یک بار بشمارید. یک روش این است که ظرف پتری را روی یک پس‌زمینه شبکه قرار داده و کلنی‌ها را در هر سلول شبکه شمارش کنید و در یک الگوی روشمند در تمام سلول‌ها حرکت کنید. علامت گذاری کلنی های شمارش شده در پشت ظرف پتری نیز می تواند یک رویکرد مفید باشد. به طور کلی، شما باید حداقل سه پلیت را بشمارید. شبکه میکروبیولوژی، شرکتی که خدمات مشاوره ای را به آزمایشگاه ها و تولیدکنندگان ارائه می دهد، پیشنهاد می کند که فقط از پلیت های حاوی 30 تا 300 کلنی برای استنتاج قوی استفاده کنید. پلیت ها با کلنی هایی که تعداد آنها بسیار زیاد است یا تعداد آنها بسیار کم است باید از یک رقت جدید دوباره کشت داده شوند. خطای انسانی در شمارش دستی پلیت ها معمولا رخ می دهد. برای بهبود دقت و کارایی، می توان از یک دستگاه شمارش کلنی خودکار استفاده کرد. شمارنده های کلنی خودکار تصویری از پلیت را می گیرند، کلنی ها را از پس زمینه جدا می کنند و سپس از یک الگوریتم برای شمارش کلنی های روی پلیت استفاده می کنند. هنگامی که دو یا چند کلنی در لبه‌ها با هم تماس دارند، الگوریتم‌ها می‌توانند در تمایز کلنی ها با مشکل مواجه شوند، بنابراین این منطقه نیاز به توسعه نرم‌افزاری مداوم دارد.

چند باکتری در 1 Colony-forming unitsCFU)    وجود دارد؟

واحدهای تشکیل دهنده کلنی برای تعیین کمیت نتایج در بسیاری از روش‌های شمارش میکروبیولوژیکی استفاده می‌شوند. یک واحد تشکیل دهنده کلنی معمولاً یک باکتری یا گروه کوچکی از باکتری است که قادر به تکثیر چندین بار برای تشکیل یک کلنی منفرد و قابل مشاهده است. اصطلاح CFU به این دلیل استفاده می شود که نمی توان مطمئن بود که هر کلنی فقط از یک باکتری به وجود آمده است.

تفاوت بین کلنی و CFU چیست؟

CFU مخفف Colony Forming Units است. این به معنای تعداد میکروارگانیسم های زنده و فعال در یک محیط است. اینها معمولاً بر حسب CFU در هر گرم یا در هر میلی لیتر اندازه گیری می شوند. کلنی به کلونی های منفرد باکتری، مخمر یا کپک که با هم رشد می کنند، اطلاق می شود. هرکلنی به عنوان خوشه ای متشکل از حداقل 50 سلول تعریف می شود که اغلب فقط می تواند از طریق میکروسکوپی تعیین شود.

منبع. https://sciencing.com/use-infrared-spectrometer-6392196.html

نویسنده.دکتر دادار